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狐敛艳

心情记录——一种蜕变与成长

 
 
 

日志

 
 

黑色星期五  

2015-04-18 22:50:58|  分类: 实验室 |  标签: |举报 |字号 订阅

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说是星期五,其实是星期四和星期五两天都很倒霉。实验频频出问题。怎么会有如此不顺利的两天呢?
星期四提取耳朵的mRNA,转cDNA,然后PCR做template合成mRNA probe。我已经做过很多次了,按说应该得心应手。结果刚开始就把第一部离心给忘了,结果mRNA里面有很多的细胞和骨头的杂质。后来做了一个轻离心分离这些杂质来弥补。结果最后,PCR白板,一天的辛苦白费。我CDNA不是用gene specific primer合的,所以没有办法泡胶看这一步是否成功。想来想去,反正我星期五要做neuronal culture,正好把耳朵拿出来再提一次。
于是星期五继续。把脑子拿出来做culture,耳朵继续提mRNA。这些实验一个关键就是要快,要保持低温。我把耳朵取出来后放到RNAlater里面,冰箱太远,于是顺带把tube放到冰上,心里想反正也是低温。于是就开开心心去做culture了。
也不知道怎么回事,那个vacuum特别强呢还是脑组织经过trypsin的分解已经太脆弱,一个不小,hippocampus丢了,cortex丢了一半。明明还有那么多的solution在试管里,怎么会损失那么大?我的心顿时一颤,开始纠结要不要往下做。well,剩下的sample比hippocampus的量还多,应该可以继续的。。
好了,回到mRNA实验。怎么回事?RNAlater在冰上被冻住了?怎么办?这还可以继续吗?我尝试解冻,可惜因为之前准备的时候已经把耳朵微解剖了,为了不丢失太多的sample,tube里残留了很多的RNAlater。归根结底,还是对trizol里面的东西了解的不清楚。一离心,发现根本没有办法分离暂留组织……一个激动,一半的trizol被我洒了……天哪,本来就没有多少sample,这样一搞,我还剩下多少mRNA?
结果的结果,自然是辛辛苦苦劳累一天却没有特别好的试验数据。幸好看看neuron,似乎已经在长了。总算有个安慰。
星期六继续。
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